Материалы и методы цитогенетических исследований

В биоиндикации радиационного воздействия нашли широкое применение цитогенетические методы исследования. Культура лимфоцитов человека является одной из обязательных тест-систем при оценке влияния мутагенных факторов окружающей среды. Одним из достоинств этой тест-системы является то, что по наблюдаемым типам аберраций можно достаточно определенно идентифицировать тип мутагенного воздействия. Так, наличие в спектре наблюдаемых аберраций повышенного уровня дицентриков и центрических колец однозначно свидетельствует о радиационной природе мутагена. Повышенный же уровень аберраций хроматидного типа может свидетельствовать о химической или вирусной природе мутагена. Использование цитогенетического метода в популяционных исследованиях позволяет выявлять лиц с повышенным уровнем хромосомных аберраций, в особенности, долгоживущих стабильных аберраций, являющихся потенциальным источником малигнизации клеток. Следовательно, индивидуальные цитогенетические показатели могут служить объективным основанием для формирования групп повышенного риска с целью последующего углубленного медицинского наблюдения.

Материалом для исследования являются клетки периферической крови контрольных доноров, и лиц, подвергшихся действию ионизирующего излучения вследствие аварии на ЧАЭС.

На протяжении 15 лет после аварии на ЧАЭС проводились цитогенетические обследования групп взрослого и детского населения, проживающего на загрязненных радионуклидами территориях Брянской, Калужской и Орловской обл. В течение данного периода авторами изученных мною статей всего было обследовано рутинным цитогенетическим методом 289 взрослых в возрасте 20 - 70 лет на момент обследования и 2355 детей и подростков в возрасте 1 - 18 лет на момент обследования, из них 60 детей и подростков было обследовано дополнительно методом FISH. В качестве контрольных групп было обследовано рутинным цитогенетическим методом 99 взрослых и 142 детей и подростков, проживающих на незагрязненных территориях Брянской и Калужской обл.

Использовался стандартный метафазный метод учета аберраций хромосом без кариотипирования. Данный метод позволяет производить достаточно полную и точную оценку основных количественных и качественных закономерностей радиационного повреждения генетических структур соматических клеток человека.

Анализировали все виды аберраций хромосом, распознаваемых без кариотипирования. Из аберраций хромосомного типа - ацентрические фрагменты (парные и точковые), центрические кольца и дицентрики. Анализ дицентриков успешно применяется при определении дозы облучения в ранние сроки, с увеличением пострадиационного периода неопределенность оценок возрастает. Стандартный метод метафазного анализа, т.е. без кариотипирования, позволяет регистрировать и определенную часть стабильных аберраций. Это, так называемые, аномальные моноцентрики, являющиеся в подавляющем большинстве случаев результатом реципрокной транслокации. Из аберраций хроматидного типа учитывали ацентрическое фрагменты (одиночные и парные) и обменные аберрации (в целом). Анализ стабильных хромосомных аберраций (транслокаций) с помощью метода FISH - более перспективный метод, можно использовать спустя годы после воздействия.